離心柱法提取原理
離心柱法核酸提取試劑盒產(chǎn)品特點:
安全低毒:試劑盒基于硅膠柱純化技術(shù),提取過程中無需使用有毒的酚、氯仿抽提。
操作簡便:30~40 min 內(nèi)完成數(shù)個樣品的DNA/ RNA 提??;
DNA提取試劑盒:
DNA純度高:提取的基因組 DNA 片段完整、純度高,可直接用 于下游 PCR 擴(kuò)增、qPCR、分子標(biāo)記以及文庫構(gòu)建等實驗。
RNA提取試劑盒:
高效去除基因組 DNA:采用膜過濾及 DNase I 消化,高效去除基因組 DNA;
RNA 純度高:提取的 RNA 無雜質(zhì)殘留,適用于對純度、完整性要求很高的下游實驗。
沒有蛋白和其他雜質(zhì)的污染,可直接 用于 RT-PCR、Northern Blot、Poly A 純化、核酸保護(hù)和體外翻譯等實驗。
DNA提取常見問題
1.柱子出現(xiàn)堵塞?
1) 樣品用量過多。建議按照說明書推薦量進(jìn)行提?。?nbsp;
2) 樣品富含多糖多酚類物質(zhì)。處理富含多糖多酚的組織,推薦用專用試劑盒;
3) 離心溫度過低。本產(chǎn)品使用操作均在室溫下進(jìn)行。
2.DNA 提取得率低?
1) 樣品用量過少。建議按照說明書推薦量進(jìn)行提??;
2) 樣品材料質(zhì)量不好。盡量選用新鮮組織樣品,樣品采集后應(yīng)液氮速凍,然后置于-80℃保存,建議 盡快提取,避免反復(fù)凍融;
3) 樣品裂解不充分。若樣品過量則適當(dāng)減少樣品量,加入 Buffer GP1 后需渦旋振蕩 1min 使其充 分混勻,可適當(dāng)延長裂解時間。
3.提取的 DNA 中有 RNA 污染?
1) 未加入 RNase A 消化。請按照說明書要求加入 RNase A 消化;
2) 樣品中 RNA 含量過多。可適當(dāng)增加 RNase A 用量或延長消化時間。
RNA提取常見問題
1.柱子出現(xiàn)堵塞?
處理方法同DNA提取常見問題Q1。
2.提取的 RNA 出現(xiàn)降解?
1) 樣品用量過多。影響裂解液的裂解能力,造成 RNase 未被充分抑制,導(dǎo)致 RNA 降解,建議參考 說明書推薦取樣量,若要增加樣品起始量,則后續(xù)實驗中各溶液量均要按等比例增加。對于內(nèi)源 RNase 含量較多的組織應(yīng)減少樣品量,適當(dāng)增加裂解液用量;
2) 樣品保存不當(dāng)。反復(fù)解凍會引起 RNA 降解,盡量使用新鮮樣品或者解凍次數(shù)不超過 2 次的樣品;
3) 操作過程中引入 RNase 污染。請使用 RNase-Free 的工具、試劑和耗材;
4) 電泳過程中發(fā)生降解。使用 RNase-Free 的 Loading Buffer、瓊脂糖和電泳緩沖液等。
3.RNA 得率低?
1) 樣品用量過多。樣品過量會影響裂解效果,建議按照說明書要求適量取樣;
2) 樣品裂解不充分。請按照說明書的要求進(jìn)行充分研磨、裂解;
3) 洗脫不充分。RNase Free H2O 需直接加到膜中央,并靜置 2 min 后再離心,必要時可進(jìn)行二次 洗脫以提高產(chǎn)量;
4) 吸附柱有乙醇?xì)埩簟J褂?Buffer PRW1 漂洗后需要開蓋晾干吸附柱中的乙醇。
4.提取的 RNA 中有 DNA 污染?
1) 樣品用量過多。超出試劑盒規(guī)定的樣本量影響裂解液的裂解能力可能會導(dǎo)致基因組的污染;
2) 次生代謝物較多。次生代謝物含量高的樣本在提取 RNA 時易出現(xiàn)基因組的污染;
3) 操作過程中需要進(jìn)行去除基因組 DNA 的操作,若 DNA 含量較多,可延長 DNase I 消化時間或重復(fù)消化。
核酸提取產(chǎn)品信息
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