肝素是一種含硫酸酯的酸性多糖，將它偶聯(lián)到交聯(lián)及活化的瓊脂糖凝膠上，該填料具有很高的物理化學(xué)穩(wěn)定性。肝素能和凝血因子和其他血漿蛋白，脂蛋白，蛋白質(zhì)合成因子，作用 于核酸和類固醇受體的酶，所以肝素瓊脂糖凝膠可以用于這類物質(zhì)的純化。

1 親和填料特性

*層析柱10mm*20cm，柱床高度5cm，20 °C

2 使用方法 

肝素-瓊脂糖凝膠 HP 對(duì)于不同的樣品的親和力不同，吸附載量取決于流速、pH、緩沖液組成和溫度等參數(shù)。 

2.1 裝柱

（1）讓所有的材料和試劑均平衡至層析實(shí)驗(yàn)的溫度。配制緩沖液，對(duì)所有的緩沖液進(jìn)行脫氣處理。 

（2）檢查層析柱所有部件，特別是過(guò)濾網(wǎng)，密封圈，螺旋塞是否緊密，玻璃管是否干凈和完整。 

（3）根據(jù)需要量取相應(yīng)量的凝膠，用去離子水清洗掉 20%乙醇。 

（4）將柱子底端用水或緩沖液潤(rùn)濕并保持一小段液位，務(wù)必使底端無(wú)氣泡。

（5）用玻璃棒引導(dǎo)勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi)，注意勿使產(chǎn)生氣泡。打開柱子出液口，使凝膠在柱內(nèi)自由沉降，連結(jié)好柱子頂端柱頭。 

（6）打開蠕動(dòng)泵，讓緩沖液用使用時(shí)流速的 1.33 倍的流速流過(guò)，使柱床穩(wěn)定（注意壓力不要超過(guò)填料最大耐壓）。

2.2 樣品的制備 

樣品應(yīng)完全溶解，并且與結(jié)合緩沖液的pH值相同。為了避免堵塞層析柱，我們建議通 過(guò)0.45μm過(guò)濾器進(jìn)行離心和過(guò)濾，以去除細(xì)胞碎片或其他顆粒物質(zhì)。 

2.3 平衡色譜柱

用5-10個(gè)柱體積的結(jié)合緩沖液平衡該柱，直到流出液電導(dǎo)和pH不變。 

用于純化血漿蛋白質(zhì)的常用結(jié)合緩沖液是10-20mM檸檬酸鈉緩沖液，pH 7.4。 由于在這些情況下肝素配體充當(dāng)親和配體，因此緩沖液中加入低濃度的NaCl以消除非特異性離子 相互作用。 在其他應(yīng)用中，通常推薦使用10 mM 磷酸鈉，pH 7.0或20 mM Tris-HCl，pH 8.0 作為結(jié)合緩沖液。

2.4 上樣 

（1）樣品用平衡液配制，樣品一定要離心或過(guò)濾后上樣。鹽濃度太大的樣品需要處理后再配。 

（2）一般情況是讓目標(biāo)產(chǎn)品結(jié)合在柱子上，用平衡液洗去雜質(zhì)和沒(méi)有結(jié)合的蛋白，再選擇一種洗脫液洗下目標(biāo)產(chǎn)品。

2.5 洗脫 

不同的樣品，吸附和洗脫方法不相同，可以根據(jù)相關(guān)的文獻(xiàn)進(jìn)行。通常通過(guò)增加緩沖液的離子強(qiáng)度來(lái)進(jìn)行洗脫。最常使用1.5-2 M NaCl，KCl或（NH4）2SO4線性梯度或梯度洗脫。

3 在線清洗 

先用0.1M Tris-HCl pH7.0緩沖液洗3個(gè)柱床體積，然后用0.1M NaOH含2M NaCl流洗3個(gè)床體積，最后用20%乙醇洗3個(gè)床體積即可。長(zhǎng)時(shí)間用酸堿洗填料會(huì)是填料的吸附能力下降，所以清洗要盡量縮短時(shí)間。

4 保存 

4-8℃密閉保存。使用完的填料，用純水徹底沖洗，最后保存在 20%乙醇中，4℃保存。 

5 注意事項(xiàng)： 

（1）上樣之前，樣品必須經(jīng)過(guò)膜過(guò)濾及去除色素，否則雜質(zhì)及色素會(huì)被吸附到填料上，影響填料的正常使用。所有的緩沖液均需要用 0.45um 的過(guò)濾器過(guò)濾。 

（2）在使用過(guò)程中，避免使用高濃度的強(qiáng)酸強(qiáng)堿，酸和堿的濃度應(yīng)低于 0.1 摩爾。堿會(huì)使流速變慢。 

（3）不同的樣品，吸附和洗脫方法不相同，可以根據(jù)相關(guān)的文獻(xiàn)進(jìn)行。